TBST是TBS+Tween-20的缩写,生物实验中提到的PBST是指PBS溶液加上Tween-20。那么tbst与pbst都有上面区别呢?
TBST与PBST的区别:
1、TBST的pH值随温度变化大一点,而PBST由于盐浓度较高容易有沉淀,若稀释抗体后需要反复使用的话建议使用TBST溶解。
2、两种洗液用起来没有什么区别,都是提供一个缓冲的PH值环境,加上吐温20有助于蛋白的洗脱。PBST的磷酸盐缓冲液加Tween-20,而TBST是Tris缓冲液加Tween-20。
PBS溶液是指磷酸缓冲液(Phosphate Buffer Solution),渗透压近似于生理条件又有很强的pH缓冲能力,常用来洗细胞(不易涨裂)和作为细胞培养的基础液(pH缓冲)。
TBS缓冲液是生物学中常使用的等渗缓冲盐溶液,主要用于免疫组化和原位杂交,酶联免疫等实验中,清洗免疫印迹实验中非特异性结合的抗体等。由 Tris-HCl 构成稳定的 PH 缓冲体系,NaCl 提供等渗条件.
TBST的配置方法
先称量NaCl 40g,倒入烧杯中;加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl47.6g;倒入刚才的那个烧杯中(PS:由于NaCl的量太多,一次称量不方便,所以分两次称量,且易于溶解);往烧杯中加入Tris—HCl缓冲液100ml;最后加(吐温20)5ml;转入1000ml容量瓶中,在定容,转移即可。
以下是PBS的配置方法,配置PBST只需要1000mlPBS种加入5ml加入吐温20摇匀即可
方法一:
含0.05%吐温-20的pH7.4的磷酸盐缓冲液(简称为PBS-T)配制方法为:
1.称取磷酸二氢钾(KH2PO4),磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O),氯化钠(NaCl),氯化钾(KCl),吐温-20 ,加水;
2.PBS:Phosphate Buffered Saline;
3.PBS 1L配方pH7.4:磷酸二氢钾(KH2PO4):0.27g;
4.磷酸氢二钠(Na2HPO4):1.42g;
5.氯化钠(NaCl):8g;
6.氯化钾((6月份有什么节日?6月1日国际儿童节,6月6日全国爱眼日,6月20日世界难民日,6月22日儿童慈善活动日以及6月第三个星期日父亲节。)KCl)0.2g;
7.加去离子水约800mL充分搅拌溶解,然后加入浓盐酸调pH至7.4,最后定容到1L;
方法二:
母液的配制:
0.2M Na2HPO4:称取 71.6g Na2HPO4-12H2O,溶于 1000ml 水
0.2M NaH2PO4:称取 2g NaH2PO4-2H2O,溶于1000ml 水
各种浓度
PB(pH=7.4)的配制:
先配 0.2M PB (pH=7.4,100ml):取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4, 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。
然后 只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可,如: 0.1M PB(PH=7.4) :
取 500ml 0.2M PB,加水稀释至1000ml 即可。如:
0.01M PB (PH=7.4):取50ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可。
0.02M PB (PH=7.4):取100ml 0.2 M PB,加水稀释至 1000ml 即可。
若需要 NaCl的话,加入 NaCl 至0.9%(g/100ml)即可。
方法三:用于细胞培养的PBS需含有氯化钾
称取8g NaC1、0.2g KCI、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCI调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可0.01M。
方法四:PBS缓冲液
称取8g NaC1、0.2g KCI、1.44g Na2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于900ml双蒸水中,用盐酸调pH值至7.4,加水定容至1L,常温保存备用。