脾虚与淋巴免疫相关性实验研究

　　2实验方法

　　2.1动物分组及模型制备小鼠随机分为3组 正常对照组（10只）、脾虚造模组（14只）、药物试验组（16只）。造模组和给药组小鼠采用耗气破气法制备小鼠脾虚模型［1］。11d造模结束次日，给药组小鼠每日灌服2g/ml浓度的四君子汤，按11g/kg体重的药量进行脾虚证的治疗，共计7d。正常对照组小鼠每日灌服等体积的生理盐水。

　　2.2脾脏T、B淋巴细胞增殖试验采用MTT比色法。四君子汤组小鼠停药后次日、正常对照组、脾虚造模组小鼠，摘除眼球放血处死。无菌摘取小鼠脾脏，按常规方法制备脾细胞悬液，其细胞活力＞95%，最后用完全IMDM营养液调整小鼠脾细胞浓度至5×106/ml。分别加入各组的脾细胞工作悬液于96孔培养板中，100μl/孔。每只小鼠设置3复孔。LPS诱导的B淋巴细胞增殖实验，加入LPS100μl/孔，终浓度为10μg/ml；ConA诱导的T淋巴细胞增殖实验，加入ConA100μl/孔，终浓度为5μg/ml。置37℃，5%CO2培养箱孵育48h后，每孔加入5mg/mlMTT10μl/孔，继续放入CO2培养箱中孵育6h。取出后，贴壁吸出上清液100μl弃掉，加入DMSO100μl/孔，以溶解甲肷物质。充分振荡后，静止20min，在酶标仪上570nm波长处测定吸光度值。以各样本的平均吸光度值代表T、B淋巴细胞的增殖程度。

　　2.3统计方法数据为计量资料以（±s）表示，组间比较用t检验。

　　3实验结果　　四君子汤对小鼠脾T、B淋巴细胞增殖能力的影响见表1。

　　表1不同组别小鼠脾T、B淋巴细胞增殖能力比较（略）

　　注 给药组与造模组比较△△△P＜0.01，给药组与正常对照组比较△△P＜0.05，造模组与正常对照组比较***P＜0.001。

　　4小结　　统计数据表明，四君子汤给药组与正常对照组小鼠比较P＜0.05，两组间有差异，但差异不显著。表明给药组小鼠已基本上恢复至正常小鼠水平；与脾虚造模组小鼠比较则结果相反，P＜0.001，两组间出现显著性差异，T、B淋巴细胞的增殖率明显低于服药7d后的给药组小鼠。表明四君子汤提升T、B淋巴细胞增殖的能力较明显。　　小鼠脾虚则T、B淋巴细胞的增殖率低，四君子汤治疗后，增殖能力得到提升，表明脾虚证与淋巴细胞免疫相互关联。现代免疫系统的防御作用，即特异性免疫功能，则是机体抵抗各种致病微生物侵袭的能力。可以看作是中医所谓正气防御外邪的作用，主要是卫气的作用。卫气作用的发挥，是肺、脾、肾三脏的功能协调旺盛的结果。即卫气化生于肾中之阳气，充养于中焦脾胃，散布于肺气的宣发。而三脏协调旺盛的关键又在于脾，其作为后天之本，对先天之本肾和子脏的肺均具有充养和协调的作用［2］。本实验显示现代免疫的淋巴免疫与脾胃功能学说两者所反映的免疫理论实质相同。

【参考文献】　　［1］关崇芬，王乃祺，谢仰洲.驴和大鼠脾虚证动物模型免疫功能的研究［J］.中国兽医杂志，1990，16（3） 38-40.　　［2］罗晶，顾红缨，徐国宪.补中益气汤对脾虚小鼠CTL杀伤活性的调节［J］.长春中医药大学学报，2006，22（2） 64.

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